🌐Medical Microbiology practical

---------------------------------------

#D_Abdullah_Ahmed

@LabMed2017

🌐‏التغيرات التي تحصل لعينة الــ. urine
👌عندما تبقى لمدة أكثر من ساعتين في room tempratior
‏
@LabMed2017

من الكتب الرايعه في المختبرات Linne & Ringsrud's Clinical Laboratory Science
👇👇

Laboratory Tests and Diagnostic Procedures, 6E (2013)
👇👇

Lymphoid leukamoid raction 👇

Causes of lymphoid reaction
💠viral infection s ↓
🔺Infectious mononucleousis
🔺infectious lymphocytosis
💠Bacterial infections ↓↓
🔹T.B
🔹bacteria cause wooping cough

--------------------------

💮Causes of lymphocytosis 👇
🌀infections↓
🦋viral : 🔰Infectious mononucleousis
🔰Acute infectious lymphocytosis
🔰cytomegalovirus
🔰VZV
🦋Bacterial : T.B , Pertussis
🦋lymphoid malagnancies: ALL CLL, NHL .....
🦋monoclonal B-cell lymphocytosis
🦋persistent polyclonal B-cell
🦋stress lyphocytosis : acute cardiovascular collapse , trauma , major surgery

----------------------------
#D_Abdullah_Ahmed

@LabMed2017

🌐Type of media:

🦋Basic media
🦋Enriched media
🦋Selective media
🦋Defferential media
🦋ternsport media

🌐Basic media

🦋هذه الميديا تحتوي على مواد مواد اوليه بسيطه لكي تنمو عليها هذه البكتيريا
وهذه المواد الاوليه تعمل على دعم اي macroorginasim
ولا تحتوي على اي مركبات خاصه
👌هذه الميديا تنمي اي نوع من انواع البكتيريا فيها

================
🌐Enriched media بيئه غنيه🔵
هذه البيئه تحتوي على مواد غنيه بالمواد الغذائيه التي تضاف الى هذه الميديا
ومعناه ان الـ bacteria تحتاج الى مواد غنيه بالمواد الغذائيه
E.g
🖋blood
🖋serum
🖋eggs
🖋protiens

هذه البكتيريا تسمي بالبكتيريا المدلعه (fustidaus )
====================
🌐Selective media
البيئه الاختياريه

يتم اضافه بعض المواد الغذائيه لهذه الــ. media لكي تسمح بنمو نوع معين من البكتيريا ولا تسمح للنوع الاخر بالنمو
🖋متل↓↓
Bile salt
Antibiotic
and any chamical اي مواد كيميائيه

Allow to bacteria to growth inhibite other bacteria

================
🌐Differential media بيئه تفريقيه
وايضا يطلق عليها اسم👇

indicator media بيئه الكواشف

👌عباره عن كواشف تضاف لهذه الميديا هذه االكواشف indicator تعطي لون مميز تتميز بها البكتيريا على حسب نوع الكاشف indicator
الى جانب ذالك تنتج غازات produce gass
=================

👉Transport media
البيئه الناقله
👌عباره عن مركبات او مواد تضاف الى هذه الميديا بحيث هذه المواد تعمل على عمليه حفظ هذه الميديا ونقلها الى مكان اخر
⚠️من مدينه الى اخرى

🦋وتمنع نمو البكتيريا الغير ممرضه الموجوده في الهواء وغيرها

💍=============__

🦋Basic media 👇
🔹Pepton water
🔹nutrient agar
🔹 nutrient broth

👌Growth any microorganisms exept fustidaus bacteria
(Inhibit fustidaus )

--------------------------------
🦋Enriched media
قلنا عنها سابقا
اننا نقوم باضافه مواد غذائيه غنيه بالــ.. 👇
💍blood
💍serum
💍protien
💍eggs

⚠️E.g ↓↓
🔹blood agar
🔹choclete ager

اولا
يجب تعقيم الميديا في autoclave عند درجه حراره 121 و15min و15par ضغط

👈ناتي كيف يتم وضع الدمblood فيها 👇

🔹blood agar
بعد مايتم تعقيمها نخرجهما من الاتوكلاف ونضعها في حمام مائي water bath
عند درجه 50 درجه مئويه
وننتضر الي ان تصل لهذه الدرجه من الحراره
وبعدها ناتي بعينه دم blood ونضيفها للميديا
وبعدها يتم صبها على الاطباق
ونتركها حتى تتصلب.

⚠️انواع التحللات في blood agar
💍partial hemolysis
👌التحلل الجزئي او يسمى تحلل من نوع الفا alpha hemolysis
💍complete hemysis
👌تحلل كامل للخلايا ويسمى بالتحلل البيتا beta hemysis
💍Gama hemysis
تحلل جاما اي لايحدث تحلل للخلايا الحمرااء في الطبق

👈اما
🔹choclete agar
بعد اخراجها من الحمام المائي يتم احضار عينه دم وصب الدم فيها وهي في درجه حراره كبيره حتي يتم تحلل للخلايا بعكس blood agar
في البلاد اجار لانريد تخلل للخلايا

اما في الشوكليت اجار نريد تحليل للخلايا
ونضيف الدم عند درجه الحراره 70- 80 درجه مئويه
وتتحلل الخلايا وتضهر باللون البني brown media

--------------------------------------
#D_Abdullah_Ahmed
@LabMed2017

♻️تابع للانواع الميديا
👇👇👇👇

🌐selective media

🦋Like:
a. MacConky agar , DCA , SSA

💍MacConky agar contain bile salt

🔹M.A→ 🔺allow to gram negative growth and gram positive inhibit

🔸MacConky 👇
تعتبر بيئة
selective media and deffrantial media

🔸DCA , SSA ↓↓
🔺Allow to salmonellae and shigella growth and other bacteria inhibit

b. Mannitol salt agar
تعتبر بيئة اختياريهselective media وبيئه تفريقيهdifferential media بنفس الوقت
🔹Mannitol salt agar ↓↓
🔺Allow to staph ( S. aureus) growth other bacteria inhibit

c. Lower stain jensen media ↓↓
contain malachite green

🔺Allow to T.B growth other bacteria inhibit

d. Thayer martin media↓↓
contain vancomycin (antibiotic)
🔺allow neisseria growth other bacteria inhibit

e. blood Telkurite ↓↓
contain potassium tellurite 🔺allow corynebacterium bacteria growth inhibit other bacteria
---------------------------------
#D_Abdullah_Ahmed
@LabMed2017

♻️تابع للمنشور السابق👇

🌐differential media

🔴MacConky Agar
الكاشف الموجود فيها 👇
🔺Indicator →neutral red

👌في حاله ان البكتيريا خمرت السكر L.F فان البكتيريا تضهر بلون pink colony
🔸lactose ferment→ pink colony
👌في حاله عدم تخمر السكر فيها فالبكتيريا تضهر باللون الشفاف
🔸non ferment lactose →colorless colony

🔵Mannitol salt agar

💍تعبر differential and selective
🔺تحتوي MSA علي كاشف 👇
Indicator →Phenol Red

👌في حاله البكتيريا خمرت الــ. Mannitol فهي راح تضهر باللون الاصفر
🔹Mannitol ferment →yellow colony on plate

👌في حاله ان البكتيريا لم تخمر الــ. Mannitol في بتعطي لون وردي
🔹non mannitol ferment →pink colony

🔴CLED media
🔸هذه الميديا تحتوي على كاشف bromothymol blue

👌في حاله البكتيريا خمرت lactose
فراح تعطينا لون yellow

🔹lactose ferment →yellow colony
👌وفي حاله عدم تخمير البكتيريا لسكر lactose
فهي راح تعطينا لون 👇
Blue or gray or green
حسب نوع البكتيريا
🔹non lactose ferment → blue , gray , green

🔵XLD media

تحتوي هذه الميديا على كاشف 👇
👉Phenol

👌في حاله ان البكتيريا خمرت الكربوهيدرات
راح تعطينا اللون الاصفر yellow colony
🔹Carbohydrate ferment →yellow colony
👌في حاله عدم تخمر البكتيريا للكربوهيدرات في هذه الميديا راحتعطينا اللون الوردي pink
🔹Non carbohydrate ferment → pink colony

🔴DCA / SSA media
هاتين الميديا تحتوي على كاشف 👇

👉neutral Red

👌في حاله ان البكتيريا خمرت الكربوهيدرات
راح تعطينا اللون الوردي pink

🔸Carbohydrate ferment →Pink colony

👌في حاله عدم تخمر البكتيريا للكربوهيدرات في هذه الميديا راح تعطينا اللون الاصفر yellow colony
🔹Non carbohydrate ferment →yellow colony

----------------------------------
#D_Abdullah_Ahmed
@LabMed2017

 ( Gram stain)
🔅صبغه غرام

من أهم أنواع الصبغات المستخدمة في المستشفيات للتعرف على البكتيريا. ويعود الفضل في اكتشافها إلى الطبيب هانس كريستيان غرام (Hans Christian Gram) ا حيث قام بتطوير هذه الطريقة لتساعده على التفرقة بين أنواع البكتيريا المسببة لذات الرئة (Pneumonia)، حيث كانت أحد أنواع البكتيريا تصبغ بلون أحمر وأطلق عليها (بكتيريا سالبة جرام) والأخرى باللون الأزرق (بكتيريا موجبة جرام).و يعتمد لون البكتيريا في صبغة جرام على التركيب الكيميائي لجدار الخلية.البكتيريا المختلفة تتفاعل بشكل متفاوت مع طريقة التلوين. لذلك تنقسم بكتيريا إلى:
*غرام-موجبة : وتتلوّن إجمالًا باللون الأزرق الغامق
*غرام-سالبة: تبقى عبر غرام دون تلوين - وإنّما تلوّن باللون الأحمر عبر الفوكسين

🔅طريقه الصبغ:

*الطريقة تتألّف من ثلاث خطوات هي:التلوين- إزالة التلوين- ثمّ التلوين المعاكس

1- في المرحلة الأولى يتمّ التلوين ببنفسجي غنتيان بـ Crystal violet
المضاف إلى الفينول Phenol (المعروف تاريخيّا بالكاربول Carbol).

.2- في الخطوة الثانية -وهي المهمّة- يختلف تفاعل البكتيريات، فبعد العلاج بالكحول -إيتانول (96%)- تفقد البكتيريا السالبة لونها المكتسب بدايةً بينما لا تتخلّى الموجبة عن لونها الأزرق الغامق الذي اكتسبته.ويعود هذا الاختلاف إلى بناء الجدار الخلويّ لديهما فالبكتيريا السالبة تملك طبقة هزيلة من الموريين Murein لكن فوقها طبقةفوسفوليبيد Phospholipid.بينما يتوفّر لدى الموجبة غلاف سميك من الموريين متعدّد الطبقات التي بينها يتجمّع محلول لوغول. وهنا يكون تأثير الإيتانول مجفّفًا حيث تبقى تجمّعات الألوان متوفّرةً في الجدار الخلوي.هذه المرحلة -أي العلاج بالكحول- تتوجّب بعض الخبرة لتحديد تشخيصٍ أكيدٍ.

3- الخطوة الثالثة تشمل تلوّن البكتيريات بمحلول ملطّف -أي قليل التركيز- من الفوكسين المزاد إلى الفينول. (وبذلك ينتج اللون الأحمر لدى البكتيريات السالبة حسب تلوين غرام).

_______________

#Khalid_ assag
@LabMed2017

🔵شرح بسيط عن
H. Pylori test
اولا 👇

💠ناتي لتعريف مختصر عن H. pylori

👈نوع من انواع البكتيريا التي تسبب 👇
Ulcer in stomach
هذه البكتيريا تغزوا الاغشيه المخاطيه في المعده وتسبب الامراضيه

حيث ان هذه البكتيريا تفرز انزيمUrease
بفضل هذا الانزيم تستطيع البكتيريا مقاومه الحمض في المعده

💠Diagnosis
🌀serological*↓↓
🔹Ab→ in serum
🔹Ag →in stool
🔹IgA→in ELISA

👌Ag ↓↓
يعتبر افضل من Ab
👌IgA 👇
يوجد في اماكن secretion
👈الطريقه السيرلوجيه 👇
♻Ab
يستخدام الـ Device
👌فكره عمل Device👇
♻اذا كان يحتوي الـ Device على Ag
نبحث عن Ab الموجود في serum
👌حيث ↓↓
يتم وضع قطرتين من serumالي الفتحه الخاصه بــ sample مع buffer اذا وجد ننتضر فتره من الزمن
بعد ذالك اقراء result
🔺اذا ظهر خط في👇
👈 منطقه test 👈وخط اخر بمنطقه control

Result👉Posteiv
🔺اذا وجد خط مكان 👇
Control only result →negativ
🔺اذا وجد خط مكان👇
control
وخط ضعيف week مكان test 👇
Result →week positive

🔺عدم ظهور اي خط في control and test
هذا يدل علي ان الكاست تالف

♻اذا كان Device محتوي على Ab نبحث على Ag الموجود في stool
👇👇👇
🔺اذا ظهر خط في👇
👈 منطقه test 👈وخط اخر بمنطقه control

Result👉Posteiv
🔺اذا وجد خط مكان 👇
Control only result →negativ
🔺اذا وجد خط مكان👇
control
وخط ضعيف week مكان test 👇
Result →week positive

🔺عدم ظهور اي خط في control and test
هذا يدل علي ان الكاست تالف ( منتهي)
👌ملاحضه
الفحوصات السيرولوجيه يفضل نبحث. عن Ag افضل من Ab??
★وذالك لان Ab يبقى لفتره طويله في serum المريض بعد الاصابه حتى وان تم معالجته

★بينما Ag يوجد في حاله الاصابه الحديثه او ان الميكروب مازال موجود مع وجود الاعراض المرضيه عند الشخص

🌀culture
تعتبر طريقه جيده لكن النمو بطي فيها
👈ملاحضه
لايتم تزريعها الا نادرا بسبب فتره النمو فيها
🌀urease breath test
نقوم باعطاء المريض اقراص علاجيه وهذه تحتوي على urea وتحتوي على ذرات كربون
وعندما يبتلع ذرات الكربون المشع التي تحتوي على urea
وفي حاله كانت البكتيريا موجوده في المعده stomach فانها تحتوي على انزيم urease
فان البكتيريا راح تعمل تكسير urea وتنتج ثاني اكسيد الكربون مع NH3

ويضل الشخص بعد مايبتلعها 10-15 دقيقه بعدها يتم تجميع الهواء داخل اكياس خاصه ونقيس نسبه urease
في جهاز خاص يقراء هذه الاشعاعات
☝👌كيف يتم الاليه
البكتيريا التي تحتوي علي انزيم Urease 👇
♻اولا
بيتم بمعادله كيميائيه👇
Urea +H2O
بواسطه انزيم اليوريا Urease بيتحول👇
Co2+NH3+H2O

ثانيا 👇
👌NH3 بيدخل بمعادله ثانيه ويكون
(NH2)2 +CO2

🌀histobathology
حيث يتم اخذ خزعه من المعده وشغلها بواسطه طبيب متخصص بالانسجه
---------------------------
#D_Abdullah_Ahmed

@LabMed2017

🌸 Cholesterol:

🔹 principle :

🔻Esters cholesterol+H2O

Ch. Esterase
-------------→ Cholesterol

+ Fatty acids.

Cholesterol + O2 ChoD
------→
Cholesterol - 4 - one + H2O2 .

H2O2 +4 + Amino phenazone +phenol PoD
-----→ quinon imine + HO2

( Red dye ) .

🔹 Procedure mothed :

* W.L : 505 nm .

°
* Temperature : RT or 37 C
* measurement : against reagent blank .

* Reaction : end point .

* Sample : serum or plasma.
نحضر 3 أنابيب :

👇 👇 👇

Black / STD/ sample W. g: 1 ml : 1 ml : 1 ml

S T D : -- -10micron: -----

Sample: ---- : ---:10micron

mix incubate for 5 mint at
°
37 C . or 10 mint at R.T
Measure absorbance test and Ab STD against reagent the colour is stable for 60 min .


🔹 Calculation :
Ab . Sample
Ch. Conc = ------------ ❌
Ab . STD
Con. STD " 200 mg/dl " .

*Normal range : 140 - 260 mg/dl

🌸الأسباب التي تؤدي إلي الارتفاع
Hyper cholesterolemia :

1 - زيادة في تناول المواد الدهنية التي تحتوى على كوليسترول .

2- قصور في وظيفة الغدة الدرقية
Hypo thyroidism.
و الصفراء الانسدادية
Obstructive jaundice.

3- بعض أمراض الكلي Nephrosis.

مرض البول السكري الغير معالج

🌸 الأسباب التي تؤدي إلى الانخفاض
Hypo cholesterolemia :

1- فرط وظيفة الغدة الدرقية Hyper thyroidism

2 - التهاب الكبد الحاد .

3- الأنيميا ، وسوء التغذية .
______________

#Fajr_Alamrey🍃🌸
@LabMed2017

🌹طريقة قياس الجلكوز🌹

📍الهدف من الفحص:_
لقياس مستوى تركيز الجلكوز(السكر) في الدم.

📍ماهي المحاليل المستخدمة:_

*4 amino phenazone.
*GOD Glucose Oxidase.
*POD Peroxidase.
*4 aminophenazonal.

# جميع المحاليل المستخدمه مخلوطه في محلول واحد (Reagent).

📍Standard Glucose =100 mg/dL.

📍العينة المطلوبة :_

بلازما (plasma).

📍طريقة العمل:_

*الخطوة الاولى:_ يتم تخضير 3 أنابيب زجاجية ويتم ترقيمها كالآتي:_
⚪Blank.
⚪Standard.
⚪Sample.

*الخطوة الثانية :_ يتم اضافه المحلول لكل الانابيب كالاتي

⚪Blank. ➖1.0 mL
⚪Standard.➖1.0 mL
⚪Sample➖1.0 mL

*الخطوة الثالثة :_
يتم إضافه Standerd وذالك فقط لانبوبة
⚪Standard.➖10 micron.
*الخطوة الرابعة:_
يتم اضافة Sample وذالك فقط لإنبوبة
⚪Sample➖10 micron.

●يتم خلط كل الأنابيب بشكل جيد.
●تحضن الأنابيب في Waterbath عند درجة 37c لمدة 15 دقيقة .

● يتم تجهيز جهاز Spectrophotometer للقياس بحيث يتم ضبط الطول الموجي عند 505nm/g.

●يتم التصفير بواسطة أنبوبة Blank.

●من ثم يتم قياس كلا" من standerd& sample كلا" على حدا باستخدام ال Cuvete.

●بعد الانتهاء من تسجيل القيم نقوم بعملية الحساب (Calculation).

📍طريقة الحساب :_

Absorbance of sample/ Absorbance of standard ×100 mg/dL.

📍وحدة القياس:_

mg/dL

📍القيم الطبيعية لفحص السكر (صائم):_
🔴 65_110 mg/dl

📍القيم الطبيعية لفحص السكر (عشوائي):_

🔴80_ 120 mg/dL.

أتمنى أن اكون قد وفقت في شرح طريقة قياس الفحص.

_------------***------------------------
#أنيس

@LabMed2017