Не надо так 🥲

#процессы

Работа ПАО и работа лаборанта - это лишь часть цепочки диагностики. Поэтому важно быть внимательными и соблюдать все требования к каждому этапу маршрута образца в ПАО. Но, работа отделения, начинается еще до того, как кусочек попадет к регистраторам, где ему присвоят номер! Работа с ним, начинается как только он будет извлечен из пациента. Это время называется - время холодовой ишемии.
Определимся:
Холодовая ишемия - это время которое возникает между изъятием образца от пациента, до помещения ткани в фиксирующий раствор.
Чем меньше это время, тем лучше будет сохранены молекулы ДНК, РНК, белки и структура ткани.
Наверняка, почти в каждом ЛПУ в направлении внесена строка с датой и временем изъятия образца или проведения операции, если же нет, то рекомендуем попросить внести эту информацию в протокол. От этих данных необходимо отталкиваться при выборе времени проводки, то есть если в отделение принесли биопсию, которую случайно на день забыли в операционной в 10% нейтральном забуференном формалине, то держать ее еще 24 часа в формалине не нужно, иначе рецепторы эстрогена и прогестерона, Her2 и ki67 покрасятся плохо, либо вообще не покрасятся.

Еще, для предотвращения аутолиза и для того, чтобы минимизировать холодовую ишемию есть специальные приборы - вакууматоры. Данный прибор помогает "спасти" материал, когда время рабочего дня лаборатории не совпадает с временем проведения операций, что бывает часто.

Важно не бросать на самотек то, к чему руки лаборанта не прикасаются, потому как по итогу лаборанту придется переделывать и переделывать срезы, а пациенту ждать и ждать результаты...
Желаем вам быть максимально ориентированными на пациента!)

Картинка для привлечения внимания к посту выше !

Вебинар "Постановка игх ручным способом"
Ручной метод ИГХ ещё долго не выйдет из моды, несмотря на развитие технологий - перебои с поставками побуждают лаборатории прибегать к переходу с аппартного на ручной метод! Также это оптимальный вариант для лабораторий с небольшими объемами и тех, кто только начинает внедрять ИГХ в работу. Тем не менее, технически этот метод сложнее аппаратного, так как этапы исследования не так стандартизованы и есть много возможностей накосячить) На вебинаре разберем основные этапы ручного метода и ошибки при выполнении.
По результатам вебинара вы получите:
- понятный алгоритм по постановке ручной ИГХ;
- понимание причин дефектов ИГХ препаратов;
- принципы оценки качества ИГХ препарата.
Вебинар пройдёт 16.04.23 с 11:00 до 13:00 на платформе Yandex Telemost. Стоимость участия - 1000 руб. Ведущие: Татьяна Короткова, Александра Игнашкова, Игорь Плакса.
Запись через наш бот
@OpenLabTeamBot
Просто переходите на него => нажимайте кнопку меню => start и следуйте указаниям

#отзывы
Уважаемые коллеги! Мы бы хотели услышать отзывы о нас, о нашей работе и коммуникации с Вами!
Не посчитайте за труд, рассказать, были ли мы Вам полезны, или может у вас есть замечания и предложения по оптимизации наших взаимодействий?
В любом случае, в нашей открытой лаборатории для Вас, рады любым мыслям!❤️

#реагенты
Wash buffer  или промывочный буфер для ИГХ-исследований - это забуференный раствор, предназначенный для отмывки несвязавшихся реагентов и уменьшения неспецифического фонового окрашивания. Обычно, промывочные буфферы делятся на два типа: PBS и TBS. 
PBS представляет собой забуференный фосфатом солевой раствор с pH 7,4.
TBS представляет собой забуференный Tris-Hcl солевой раствор с pH 7,5. 
  PBS и TBS выполняют функцию стабилизации связывания антиген-антитело, поскольку они стабилизируют трехмерную структуру белков. Это значит, что после депарафинизации и демаскировки (варки) исследуемой ткани, важно привести pH к нейтральному значению, как в живой клетке, при которой существуют и функционируют белки. Изменение pH может оказывать значительное влияние на конформацию белка, так как pH влияет на заряд аминокислотных остатков в молекуле белка. Закисление и защелачивание среды, будут приводить к изменению конформации белка, что может привести к скрытию атигена (и антитело не свяжется), или наоборот раскрытию и неспецифическому связыванию (фоновому окрашиванию).  

  При выборе между этими буферами важно отметить, что TBS предпочтительнее с антителами, мечеными щелочной фосфатазой, тогда как PBS, наоборот будет мешать сигналу меченному щелочной фосфотазой, но будет предпочтителен в исследованиях с аминами. В общем и целом, буферы схожи, можно использовать любой.

  И часто небольшое количество детергента Tween20 добавляют к промывочным растворам (и блокирующим агентам) для уменьшения фонового окрашивания, а буфер известен как PBST или TBST. 

Рецепты по разведению вы можете найти на сайте:

Забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS)
https://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/pbs.htm

Забуференный трис физиологический раствор (TBS)
https://www.ihcworld.com/_protocols/washing_buffers/tbs.htm


!!!Важная информация! Трис является токсичным полиамином, при работе необходимо использовать перчатки! Тогда как PBS сделан из фосфатов, поэтому он стоит дешевле, и прост в приготовлении (важный момент для хорошего буфера). Он не токсичен, совместим по осмолярности и нечувствителен к перепадам температуры, тогда как Трис - нет.

#ярекомендую

Уважаемые коллеги и друзья, мы вводим интересную рубрику "#ярекомендую", где вы можете оставить отзыв о каком-либо продукте.
Вот например:

Расхваленный и очень удобный в использовании PAP Pen.
PAP Pen — это специальный маркер для создания пленкообразного термостойкого водоотталкивающего барьера, который удерживает реагенты в клетках и тканевых препаратах и предотвращает смешивание реактивов при дифференциальном окрашивании нескольких срезов на одном предметном стекле, позволяя тем самым использовать меньшее количество дорогостоящих реагентов.

Применяется в методах иммуногистохимии, иммуноцитохимии, иммунофлюоресценции и гибридизации in situ.

-Цвет — зеленоватый оттенок;
-не растворим в спирте и ацетоне;
-растворим в ксилоле;
-500 применений.
Средняя стоимость: 50-70 т.р.

Минусы:
-высокая себестоимость;
-при неаккуратном использовании бывают протечки:
-желательно насухо протирать стекло перед обводкой, чем можно случайно зацепить срез.

Аналоги:
Восковой мелок для рисования или церковная свечка)
Последнюю уже опробовали, работает нормально. Ожидаем видео-запись😏

#задачка
Оптимальный титр антител - (в иммуногистохимии) это максимальное разведение антисыворотки (или моноклонального антитела), при котором достигается максимальное специфическое окрашивание с наименьшим количеством фона в конкретном тесте.

Разведения обычно выражают как отношение концентрированного раствора к общему объему желаемого разбавления. Например, чтобы получить разведение 1:10, необходимо смешать одну часть концентрата с девятью частями разбавитель. Также, не сложно посчитать, сколько понадобится разведенного антитела на 1 стекло или несколько.

При больших разведениях, "9" можно округлить, то есть разводя 1:200, можно посчитать и взять 1 мкл концентрата и 200 мкл дилюента.

Дальше, если вы знаете, что вам нужно на выходе получить 1000 мкл разведенного антитела, с титром 1:100, то мы 1000/100 и получаем значение 10 - это то,сколько необходимо взять концентрата, и остается только довести дилюентом до необходимого объема, то есть мы берем 990 мкл разбавителя (1000-10).

Потренируемся)

Когда рассчитываешь объем концентрата и разбавителя

📌Для разведения антител 1:500 необходимо взять 1 часть антител и добавить ее к 499 частям буферного раствора. Таким образом, общий объем раствора будет равен 500 частям, где 1 часть - это антитела, а 499 частей - это буферный раствор.

📌Сложнее разобраться с разбавлением тех антител, которые используются редко,но имеют большой титр, например 1:2000, 1:10 000, 1:100 000, и т.д.

📌Если у вас стоит задача развести концентрат 1:150 000, вам необходимо сделать следующие шаги:
сделать разведение 1:150
вторым действием берете 1мкл из 1:150 и добавляете 1000 дилюента.

📌При разведении антител важно учитывать специфику каждого типа антител и требования протокола, поэтому необходимо следовать инструкциям, приложенным к конкретным антителам. Также необходимо соблюдать меры предосторожности и гигиены при работе с биологическими препаратами.

📌По задачке №2: 
Необходимо получить разведение 1:2000 в конечном объеме = 500 мкл. Сколько нужно взять концентрата и разбавителя?

Наиболее простая математика будет следующая ->
считаем пропорцию
1:2000
х:500
х=500/2000=0,25 мкл АТ, то количество антитела, которое необходимо взять для приготовления раствора 1:2000
Теперь найдем в каком объеме разведения 1:10 содержится найденное количество мкл антитела. Записываем пропорцию:
1:10
0,25:у
у=2,5 мкл, это то количество раствора с разведением 1:10, которое содержит необходимые нам 0,25 мкл Аt.
Так как общий объем должен быть 500 мкл, то находим сколько диюлента нам надо добавить к 2,5 мкл (1:10) простым вычитанием:
500-2,5=497,5 мкл дилюента
Ответ: 2,5 мкл- раствора 1:10 и 497,5 мкл - диюлента.
📌 Есть и другие способы решения этой задачи. Мы привели вам только один из них.


P.S. Хотим выразить особую благодарность @Веронике Вячеславовне, за вклад в обучение и любовь к математике!