今天调光路了么? – Telegram
拆了拆了。重新搭建
day 1
frame重新固定;不使用frame的tube lens;输入和输出光路从objective直接引出;搭了块儿板让设备更紧凑但好像有点高😅
day 2
excitation光轴基本搭好了。最后一个镜子不知是什么问题会把光路往下导,gg
day 3
拼了一个mount来解决昨天镜子不平的问题😅 虽然平了 但感觉不稳 目前也没办法
emission光轴搭了一半,扫描镜的线没找到,搞不下去了😅
忙别的东西去了。这周没有时间搞这个了
其实还是搞了搞的,但就真的misalignment,很难受,却做不到更好
而且啊其中一个galvo 每次通电得初始位置不一样。之前一直以为是我的问题但其实不是。更难受了。每次都要offset,💩
定妆照
升级电脑,换成ni daq
(虽然也不是什么强大配置
新建文件夹:
第一次这么直观的看image plane和pupil plane。这才发现我conjugate做的很差(
image plane(左)能看到是一个凸月形状的样本。在pupil plane就看不到这个形状了,因为pupil这里展现的是样本像的频域,可以看到一个橙色的圆形。圆形是因为物镜口径是圆型,橙色是因为荧光是橙色。

还可以看到pupil plane中间有一个蓝点(和橙色在一起有一些显绿),这个蓝点是激发光。激发光打在样本上时基本是平行的,在频域就大致是一个点。
sample stage现搭教学
快过年了,不要再讨论什么confocal、multiphoton、lightsheet了。你夸你的显微镜技术好并不能给你带来任何实质性作用,那群搞生物的桌上摆一大堆epifluorescence,你默默的在opticaltable上调你的破galvo。别的组在department meeting上问你收获了什么,你说我组了一个8轴galvo的lightsheet,导师们都懵逼了,你还在心里默默嘲笑他们,笑他们不懂volumetric imaging,不懂你的depth reassignment,也笑他们拍个图都对不到焦,分辨率和NA的关系都没搞清楚。别的组都在说自己的组一年的收获,勾搭了eric betzig搞起了MOSAIC,拿funding买了个MERFISH,用一个连Z都扫不了的epifluorescence发了5篇nature,你的导师默默无言,说你搭了个新lightsheet,用起来要开三台电脑,sample都放脱水了图都采不完,一重建分辨率不到2微米。